CAR-T細胞凍存袋分享細胞凍存方法

 　　CAR-T細胞凍存袋分享CAR-T細胞凍存方法，包括以下步驟：

　　(1)將培養的CAR-T細胞轉移至離心管中，在200-500g條件下，離心5-8min，棄掉上清液;

　　(2)將離心后的細胞團先用DPBS重懸，確認細胞團被*打碎，在磁力架上靜止2-5分鐘，實現細胞跟磁珠的分離;

　　(3)用移液管將細胞懸液轉移至新的離心管中，重復去磁珠操作兩次;

　　(4)將清除磁珠后的細胞懸液在200-500g條件下，離心5-8min，棄掉上清液，備用;

　　(5)根據需要凍存的細胞總數量，計算凍存介質的體積，將細胞重懸于凍存介質中;

　　(6)將細胞分裝于凍存管或者凍存袋中，放置于-80℃超低溫冰箱中緩慢冷凍8-18小時，或者放置于程序降溫儀中按照相應程序降溫至-85℃;降溫結束后，將細胞凍存管或者凍存袋轉移至液氮中長期保存。

　　回輸需要時，在液氮條件下運送至治療醫院，在37℃條件下快速解凍后，可以直接回輸給治療病人。

　　所述步驟5中的凍存介質由氯化鈉、二甲基亞砜、葡萄糖、人血白蛋白、低分子葡聚糖和RPMI-1640基礎培養基組成，其中氯化鈉的質量濃度為0.45-0.9%，二甲基亞砜溶液的體積濃度為5-15%，葡萄糖的質量濃度為5-20%、人血白蛋白的質量濃度為10-50%，低分子葡聚糖的質量濃度為5-20%。

　　優選的，所述步驟5中的凍存介質，其中氯化鈉的質量濃度為0.9%，二甲基亞砜溶液的體積濃度為10-15%，葡萄糖的質量濃度為5-10%、人血白蛋白的質量濃度為10-30%，低分子葡聚糖的質量濃度為5-10%。

　　進一步優選的，所述步驟5中的凍存介質，其中氯化鈉的質量濃度為0.9%，二甲基亞砜溶液的體積濃度為10%，葡萄糖的質量濃度為5%，人血白蛋白的質量濃度為10%，低分子葡聚糖的質量濃度為5%。

　　所述步驟5中CAR-T細胞的凍存密度為1×106個/ml-500×106個/ml。