如何避免或減少重組蛋白發酵表達過程中包涵體的形成

　　重組蛋白表達過程中，包涵體的形成使后續活性蛋白的收率降低，并且包涵體的復性及純化過程復雜，難度大。那么如何避免或減少重組蛋白發酵表達過程中包涵體的形成呢?
 

　　表達調控
 

　　包涵體的形成，主要原因是表達速率過快，過量表達導致蛋白堆積而成。那么通過降低重組蛋白的表達速率來減少或抑制包涵體的形成，可以嘗試低溫誘導等方式減少包涵體的形成。
 

　　優化序列
 

　　蛋白序列中含硫氨基酸增多及脯氨酸的數量增多，更容易形成包涵體，含硫氨基酸數量多，二硫鍵若不能正確配對極易形成包涵體，而脯氨酸是D型氨基酸，常需要異構酶輔助折疊。所以可以通過定點突變等方式來降低含硫氨基酸和脯氨酸的數量從而減少包涵體的形成。
 

　　共表達
 

　　在蛋白序列上連接一段可溶性表達的序列，來改變蛋白的氨基酸組成及各種氨基酸占的比例，也可以有效避免或減少包涵體的形成，比如加GST標簽有一定的促溶作用。
 

　　環境調控
 

　　蛋白所處環境也會影響其形成包涵體，比如細胞內的環境pH接近蛋白的pI時也容易形成包涵體，還有滲透壓也會影響細胞內的疏水作用力，也會對蛋白的折疊積累形成影響，那么減少或避免包涵體的形成可以嘗試改變發酵過程中的pH和培養基中鹽的種類及濃度，來避免或減少包涵體的形成。
 

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