心肌分化試劑盒的凍存方法

 　　心肌分化試劑盒具備心肌定向分化能力，可用于人多潛能干細胞(hESC/iPSC)向心肌細胞誘導分化。分化獲得的心肌細胞表達常規的心肌特異性基因，包括多種收縮蛋白和離子通道。同時，心肌細胞具備典型的心肌細胞電生理活性，能夠對電生理和生物化學刺激做出心肌細胞的常規反應。分化獲得的心肌細胞，各項特征與人體內心肌細胞高度相似，適合于基礎和臨床科學研究等。

　　心肌分化試劑盒包含有多肽類分化因子和涉及心肌細胞分化關鍵信號通路的調控因子的無血清培養基。在對人ESCs和iPSC不同細胞系的實驗中，本試劑盒能得到心肌細胞分化效率比所有已發表方法都高的結果。

　　心肌分化試劑盒的特點主要有以下幾點：

　　1.單層培養，均質分化

　　2.多細胞系可重復性好

　　3.跳動層細胞7天即可觀察

　　4.誘導分化程序簡單便捷

　　心肌分化試劑盒的凍存方法：

　　1、如果需要將心肌細胞長期保存，可對心肌細胞進行凍存，凍存操作會導致40%左右的細胞死亡。

　　2、37℃水浴預熱PBS溶液和Accutase傳代工作液，4℃預冷心肌分化試劑盒。

　　3、吸走心肌維持培養基，并且加入PBS溶液洗一次。

　　4、加入Accutase傳代工作液使之*覆蓋皿/瓶底。

　　5、37℃孵育15-20分鐘，顯微鏡下觀察到大部分細胞相互分離，表面細胞消化時間理想。

　　6、用槍扇形吹打培養皿/瓶底，使皿/瓶底貼附的心肌細胞脫落，將細胞轉移至15ml離心管中，再向皿/瓶中加入適量PBS溶液潤洗皿/瓶底，收集剩余細胞加入15ml離心管中。(注：吹打力度要輕柔，避免損傷心肌細胞)

　　7、200g離心5分鐘。棄去上清，用重懸細胞，輕柔吹打混勻。

　　8、按復蘇所需要的量，1ml每管凍存。

　　9、以1℃每分鐘的速率降至-80℃過夜(一般常見商品化凍存盒均可提供此條件)。

　　10、-80℃過夜后，將凍存細胞轉移至液氮保存。

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