轉染試劑盒的標準操作步驟

 　　轉染試劑盒可用于轉染的細胞包括各種細胞株和原代細胞，例如成纖維細胞，成肌細胞，間充質干細胞，上皮細胞等等。轉染試劑盒都經無菌處理，并通過嚴格質量檢驗，可以直接使用。轉染試劑盒可在室溫(15～25℃)保存三個月，4℃保存一年，-20℃保存一年以上。

　　轉染試劑盒的標準操作步驟：

　　1. 使用前預熱試劑至常溫。

　　2. 轉染前一天，接種適量細胞懸液至100-mm培養皿、60-mm培養皿或6孔板中，放置到潮濕37°C 5% CO2 培養箱培養過夜。

　　3. 次日，吸去細胞培養液，加入新鮮培養液。

　　4. 取兩根無菌1.5ml eppendorf管，分別記為A、B。按下表，根據培養皿不同而加入不同體積的試劑：

　　5. 用移液管混勻B管中溶液并將B管中溶液輕輕逐滴加入到A管中。用氣泡法混勻轉染混合物，這一步盡量在2分鐘內完成，室溫孵育30分鐘。

　　6. 將混合物逐滴加入到細胞中，輕輕搖晃培養皿使混合物均勻分布在細胞表面。

　　7. 放置到潮濕37°C、5%CO2培養箱中培養過夜。

　　8. 次日早上用新鮮培養基更換細胞培養液，于37℃ 5%CO2培養箱中繼續培養24-48h。

　　9. 檢驗轉染效率(如熒光觀察，蛋白質印跡等)。

　　轉染試劑盒使用注意事項：

　　轉染前以細胞融合度不超過80%為宜，接種密度因所采用的細胞系和細胞的倍增時間而有所不同。

　　高純度的質粒是獲得高轉染效率的必要條件，要確保A260/A280大于1.8，并且電泳檢測抽提到的質粒90%以上都是超螺旋。

　　轉染時，B管中溶液輕輕逐滴加入到A管中，請勿混亂順序。

　　溶液的pH值關系到轉染效率，盡量避免把轉染試劑盒的溶液長時間暴露在空氣中，以免被空氣中的二氧化碳酸化。

　　轉染時由于質粒不同、細胞不同，*的質粒用量需自行摸索。

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